目的探讨体外培养条件下HBV与DNAJB4基因转录水平表达的关系,揭示HBV诱发肝癌发生的新机制,为HBV感染的治疗提供新的思路,为深入理解DNAJB4的转录调节机制提供新的知识。方法1.用RT-PCR和Real-time PCR检测DNAJB4在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中转录水平的表达。2.构建DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒,分别与HBV表达质粒、对照质粒共转染HepG2细胞,利用双荧光素酶报告基因检测系统,检测荧光素酶活性。3.构建HBs、HBp、HBc及HBx表达质粒,分别与DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒共转染HepG2细胞,利用双荧光素酶报告基因检测系统,检测荧光素酶活性。结果1. RT-PCR结果显示DNAJB4在HepG2.2.15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的3倍,Real-time PCR结果显示DNAJB4在HepG2.2.15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的2.59倍。2.成功构建了DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒,且DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性是其对照组的2.28倍。3.转染HBs和HBc表达质粒组的相对荧光素酶活性分别是其对照组的2.11倍和1.77倍,而HBx、HBp表达质粒对荧光素酶活性没有影响。结论在HepG2.2.15细胞中,HBV能通过增强DNAJB4启动子活性增加DNAJB4转录水平的表达,其中HBs和HBc蛋白起主要作用。本研究为深入理解DNAJB4的转录调节机制提供了新的知识,为HBV引起的肝癌提供了新的见解。
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