骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是骨髓内造血干细胞以外的非造血干细胞,具有多向分化潜能。骨髓间充质干细胞分化为多种功能细胞的研究进展,为治疗缺血性胰腺疾病提供了可能。目的:从细胞形态学对骨髓MSCs的生长特性进行观察,探讨骨髓MSCs分离纯化的方法;通过对动物模型注入标记的细胞,探讨MSCs对胰腺缺血损伤的治疗水平,并进一步探讨其治疗途径和机制。方法:抽取Wistar大鼠乳鼠骨髓,采用贴壁培养和组织块培养相结合的方法得到高纯度的骨髓MSCs,在含20% FBS的L-DMEM培养液中扩增培养。传3代后用EGFP重组腺病毒标记细胞,注入胰腺缺血性损伤动物模型胰腺局部,观察动物存活率,冰冻切片共聚焦显微镜观察标记细胞位置。结果:1、分离获得了高纯度贴壁生长的MSCs。MSCs原代培养呈均匀分布的集落样生长,呈梭形,传代培养中细胞均质性明显提高,细胞传代稳定;2、注入细胞的动物模型存活率明显高于对照组;3、共聚焦显微镜显示表明,注入细胞24h后,细胞可到达受损部位,并聚集在微循环系统中,以后逐渐大量进入受损部位,在循环系统及导管系统中有较高表达。结论:1、本实验通过对大鼠骨髓MSCs进行分离、体外培养,同时从细胞形态和生物学特性进行观察,认为采用贴壁培养和组织块培养法相结合,可以获得纯度较高和活性较强的骨髓MSCs,且方法简便易行;2、骨髓MSCs易分离培养,体外增殖和传代能力强,通过离体培养可使体内环境下低丰度的MSCs实现数量扩增;3、经培养纯化的MSCs无需体外诱导即可在体内应用,且效果良好;4、根据共聚焦显微镜对冰冻切片的观察,可证实MSCs修复缺血性胰腺损伤的主要途径是首先修复微循环系统,这可能就是MSCs修复缺血性胰腺损伤的机制。
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