斑马鱼胚胎发育过程中cyclinC基因母型和合子型表达的初步研究 目的:通过研究cyclin C基因在母型和合子型的表达研究,阐释其在中囊胚过渡时期的可能作用。 方法:（1） 通过体外受精的方式,获取数量较多的斑马鱼胚胎;（2） 使用TRIzol Reagent抽提胚胎的总RNA;（3） 通过RT-PCR、5’/3’-RACE等方法,在斑马鱼中克隆出全长cyclin C基因,提交GeneBank,并分析基因序列,对不同物种的Cyclin C的基因同源性进行分析;（4） 通过做Northern blot实验,来验证该基因的存在以及它的大小;（5） 利用地高辛（DIG）标记的探针,做不同发育阶段斑马鱼胚胎的整体原位杂交实验,阐释cyclin C在时空层面的表达情况;（6）通过Dct基因来建立siRNA技术平台,为进一步研究cyclinC基因的功能作准备。 结果:（1） 根据cyclin C在其他物种中的已知序列,设计特异性引物,PCR得到513bp的片段。通过3’-RACE,得到2537bp的片段,接着通过5’-RACE后,得到355bp的片段。拼接这些序列,并用另外设计的一对引物,PCR得到cyclin C基因的全长序列,总共2950个碱基,这是国内外首次在斑马鱼中克隆成功的。分析这个斑马鱼cyclin C基因序列,发现存在一些核酸多态性（即与其它物种的cyclin C基因比较,有些碱基发生了改变）,而且也发现提交到GeneBank的有些EST序列有错误。进一步分析所得的基因序列,发现5’端不编码区长为90bp,还包括将来翻译成甲硫氨酸序列的序列,即起始密码子（翻译出现的第一个氨基酸）。还在5’端的不编码区,发现了2个终止密码子,分别在核酸序列中的-66和-45处。整个序列有较长的3’非编码区,在末端有poly（A）的尾巴。这些现象表明我们所得的序列是一个完整的基因序列。而整个编码区总共只有849个碱基
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