目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因（HPV6b L1）的双顺反子表达载体，并使其在哺乳动物细胞内表达，以期建立含有人乳头瘤病毒6b型晚期基因的细胞模型，便于进一步研究人乳头瘤病毒L1蛋白的分子生物学特性和对其免疫学干预及治疗的研究奠定基础。方法表达质粒pEGFP-HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接，热冲击入感受态大肠杆菌DH5α，经扩增后酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP应用阳离子脂质体转染技术将其转染进NIH3T3细胞，荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达，RT-PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成。结果通过双酶切及测序鉴定，重组质粒中插入的目的基因片断及载体DNA大小、方向和插入位点均正确，pIRES2-HPV6bL1-EGFP构建成功。重组体成功转染进NIH3T3细胞，并用选择性培养基G418筛选。同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达。进一步进行RT-PCR，检测到HPV6b L1 mRNA的生成。结论携带HPV6b L1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP成功构建，并转染进NIH3T3细胞。经荧光倒置显微镜观察及RT-PCR方法检测证明HPV6b L1在NIH3T3细胞内成功表达。该研究成果可望进一步用于研究人乳头瘤病毒晚期基因L1蛋白的生物学特性和进行防治疫苗的基因工程研究。
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