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L-meq对MDCC-MSB1细胞端粒酶活性影响的研究

论文摘要

本研究利用现代分子生物学的研究手段和方法研究了L-meq基因在体外培养MDCC-MSB1细胞中的表达及其对端粒酶活性的影响。研究以MDV基因组为模板通过PCR方法扩增了L-meq基因,将其亚克隆构建原核表达质粒pET-28a-L-meq和真核表达质粒pcDNA3.1(+)-L-meq。将重组质粒pET-28a-L-meq转化表达受体菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达的融合蛋白带大约位于55kDa处,表达蛋白占菌体蛋白的18.88%。用纯化后的L-MEQ蛋白对獭兔进行常规免疫,得到较高效价的多克隆抗体(1:12800)。继而构建了L-meq基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-L-meq并将其转染鸡淋巴瘤细胞系MDCC-MSB1细胞。应用RT-PCR方法和Western-blot方法检测到L-meq基因在MDCC-MSB细胞中能够稳定表达,并抑制了端粒酶活性。利用实时荧光定量RT-PCR方法检测了转染前后chTERT的表达量,结果显示L-MEQ的稳定表达下调了chTERT mRNA的表达水平。总之,本研究成功克隆了L-meq基因,应用其纯化蛋白制备了多克隆抗体,并研究了L-meq基因对鸡淋巴瘤细胞系MDCC-MSB1端粒酶活性的影响,推测L-MEQ蛋白可能通过抑制MEQ蛋白的功能而起到抑制表达meq基因的vvMDVⅠ的复制,进而抑制细胞的端粒酶的活性。这些研究结果都为进一步探讨L-meq的一些生物学特性和L-MEQ在抑制肿瘤发生过程中的重要作用奠定了基础,并且为相关肿瘤的研究提供了更多的理论参考。

论文目录

  • 内容提要
  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 MDV致病机理的研究进展
  • 1 MD概述
  • 2 MDV基因组结构的特点
  • 3 MDV致瘤相关基因
  • 4 马立克氏病肿瘤发生过程中病毒与宿主的关系
  • 第二章 端粒、端粒酶与肿瘤关系的研究进展
  • 1 端粒、端粒酶的发现
  • 2 端粒的结构与功能
  • 3 端粒酶的结构与功能
  • 4 端粒、端粒酶与肿瘤
  • 第二篇 研究内容
  • 第一章 L-meq基因的原核表达及多克隆抗体的制备
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第二章 L-meq对端粒酶活性影响的研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师简介
  • 作者简介
  • CURRICULUM VITAE
  • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/f69ea16cfe8e7c50425f3fc1.html